원리 카운팅 챔버의 특정 제곱 수에서 현미경 검사 중 백혈구를 계산하고 혈액 희석 및 계수 실의 부피를 고려하여 1 리터 혈액에서 그 수를 계산합니다.
시약 : 메틸렌 블루 용액 몇 방울로 백혈구의 핵을 염색하기 위해 착색 된 초산 3-5 % 용액. 해결책에는 파란 색깔이 있고, 장시간에 저장 될 수있다.
결정의 과정. 마른 시험관에 0.4ml의 아세트산 용액을 부어 넣는다. 0.02ml의 혈액이 손가락에서 채집됩니다 (항응고제로 안정화 된 정맥혈을 사용할 수 있습니다). 피펫의 끝 부분을 닦은 다음 튜브의 바닥으로 혈액을 불어 넣고 혼합하고 다시 다이얼 한 다음 혈액과 시약 혼합물을 분출합니다 (피펫 팅). 튜브에 라벨을 붙이고 카운팅 할 때까지 그대로 두십시오. 아세트산 용액과 혈액의 혼합물을 저장하는 것은 2 ~ 4 시간을 넘지 않는 것이 좋습니다.
아세트산으로 시험관에서 희석 한 혈액을 철저히 섞은 다음 계수 실에 채우십시오. 채워진 챔버는 백혈구를 정착시키기 위해 1 분 동안 수평 위치에 놓여 있습니다. 챔버의 수평 위치를 변경하지 않고, 그것이 현미경 스테이지와 저배율에 위치 (10 × 접안 렌즈 × 8)에 대응하는 작은 1,600 큰 사각형 (100)으로 백혈구를 계산.
정확성을 높이기 위해 격자의 왼쪽 위 모퉁이에서 시작하여 작은 정사각형과 줄무늬로 나뉘 지 않은 큰 사각형의 격자를 통해 백혈구가 계산됩니다. 콘트라스트를 좋게하려면 시야를 어둡게하고 콘덴서를 떨어 뜨리고 조리개를 닫으십시오. 사각형 안쪽에 위치하고 두 줄에 놓인 셀은 동일한 셀을 두 번 셀하지 않도록 계산됩니다.
백혈구 수의 계산은 다음 식에 따라 수행됩니다.
여기서 X는 혈액 1 μl에 포함 된 백혈구 수입니다. 그리고 - 100 개의 큰 사각형에있는 백혈구의 수; 20 - 혈액 희석; 100은 큰 사각형의 수입니다. 하나의 커다란 사각형의 부피가 1/250 μl이기 때문에 250은 1 μl 당 변환 계수입니다 (정사각형의 변은 1/5 mm, 높이는 1/10 mm 임).
실제로, 혈액 1 μl에서 백혈구의 수를 계산하기 위해, 100 개의 큰 사각형의 숫자에 50을 곱하고 1 리터에서 결과 값에 106을 곱합니다.
참고 백혈구 수를 계산할 때, 6 ~ 8 %의 경우에는 오류가 불가피합니다.
- 말초 혈액에 많은 수의 정상 세포가 존재하면 백혈구 수 (백혈구와 정상 세포 - 유핵 세포)에 포함됩니다. 백혈구의 수를 적절히 설정하기 위해서는, 전체의 유핵 세포 수에서 정상 세포의 수를 빼야합니다.
- 나머지 오차는 계수 실에서 적혈구 수를 계산할 때 발생하는 오차와 유사합니다.
백혈구 수
0.5로 백혈구 혼합기에서 혈액을 수집합니다. 혈액에 즉시 3 % 아세트산 희석액을 넣고 11에 표시를하십시오. 모세 혈관의 내용물을 철저히 섞어서 고리 에브 챔버를 채우십시오. 계수는 적어도 100 개의 큰 사각형에서 수행됩니다. 이것들은 큰 줄이 아니며, 줄거리는 줄거리로 4 개로 나뉘어 있습니다. 다음 식에 따라 1 l의 혈액 중 백혈구 수를 계산합니다.
L = N x 4000 x 20 x 106
여기서 N은 100 개의 큰 사각형의 백혈구 수입니다. 4000은 작은 사각형의 부피를 혈액 1 μl의 부피로 줄이는 승수입니다. 20 - 혈액 희석 정도에 대한 보정; 1600 - 작은 정사각형에있는 백혈구의 수; 10 6 - microliths의 수는 1 l입니다.
등록 권장 사항
결론적으로, 얻은 결과를 정상 값과 비교하십시오.
실습실 № 7.3
혈액 내의 헤모글로빈 양 측정
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백혈구 수 계산
백혈구 증은 절대적 (참)과 상대적 (재분배) 일 수 있습니다.
절대 백혈구 증가증은 급성 염증 과정, 조직 괴사, 급성 세균 감염 (장티푸스, 브루셀라증, 야 수증증을 제외하고), 알레르기 질환, 악성 종양 (조직 파괴), 뇌의 폐쇄 및 뇌출혈, 당뇨병에서 관찰됩니다. 우울 성 혼수 상태, 쇼크, 급성 실혈, 일차 반응으로 - 방사선 질환. 백혈구 수의 유의 한 증가는 백혈병에서 발생합니다.
상대적 (재분배)은 그녀의 창고를 위해 봉사하는 기관의 혈액 흐름에있는 백혈구를받는 결과입니다. 식사 후 (음식 백혈구 증), 냉온욕, 강한 감정 (혈관 백혈구 증), 강렬한 근육 일 (근원 성 백혈구 증) 등이 발생합니다.
백혈구 감소증 백혈구 감소증은 독성 물질 (비소, 벤젠 등), 일부 약제 (sulfanilamides, chloramphenicol, butadione, immuno, cyclophosphamide 등), 바이러스 (인플루엔자, 바이러스 성 간염)에 노출 된 결과 골수의 기능적 기능을 억제하는 지표로 간주됩니다., 홍역 등), 미생물 (장티푸스, 브루셀라증 등), 전리 방사선, X 선 및 과소 형성 (비장 기능 증가)이 있습니다.
백혈구 증 (leukocytosis)과 백혈구 감소증 (leukopenia)은 모든 유형의 백혈구 총 수 (예 : 혈액이 두꺼워진 백혈구 증)의 비례 증가 (감소)가 거의 없습니다. 대부분의 경우 하나의 세포 유형의 수가 증가 (감소)되기 때문에 "호중구 감소증", "호중구 감소증", "림프구 감소증", "림프구 감소증", "호산구 증가증", "호산구 감소증", "단구 증가증", "단구 감소증", "Basophilia."
백혈구 수의 변화에 대한 임상 적 평가에서, 개별 형태의 백혈구 백분율, 즉 백혈구 수식에 대한 비율이 중요합니다.
건강한 사람의 백혈구 수 :
상대 금액 절대 금액
호염기구............................0-1 % 0-0.0650 x 10 9 / l
호산구.........................0.5-5 % 0.02-0.30 x 10 9 / l
호중구 : - myelocytes............ 0 % 결석
- 찔렀다. 1-6 % 0.040-0.300 x 10 9 / l
- 분절 된....47-72 % 2.0-5.5 x 10 9 / l
림프구.................................. 19-37 % 1.2-3.0 x 10 9 / L
단핵구...............................3-11 % 0.09-0.6 x 10 9 / L
백혈구 계수는 염색 된 말초 혈액 도말 검사에서 수행됩니다. 백혈구 조제 연구의 결과를 정확하게 해석하기 위해서는 절대량으로 계산하는 것이 좋지만 상대적인 표본에서는 계산하지 않는 것이 좋습니다. 가장 일반적인 방법은 Romanovsky-Giemsa, Pappenheim에 의한 도장 방법입니다. 침지시 적어도 200 개의 세포가 세어지고 백혈구의 특정 유형의 백분율이 유도됩니다. 다른 혈액 매개 변수와 임상 사진을 고려한 백혈구의 분석은 진단의 가치있는 방법이며, 진단과 질병의 예후 결정에 도움이됩니다.
호중구의 주요 원인.
급성 세균 감염 - 지역화되고 일반화.
조직의 염증 또는 괴사.
의약 효과 (코르티 코 스테로이드).
호중구 감소의 주요 원인.
감염 - 박테리아 (장티푸스, 브루셀라, 야자 열병, 파라 티스 팬더) 및 바이러스 성 (전염성 간염, 홍역, 인플루엔자, 풍진 등).
골수 생성 억제 및 과립 세포 생성 억제 (전리 방사선, 화학 제제 - 벤젠, 아닐린, DDT, 의약 효과 - 세포 증식 억제제 및 면역 억제제, 비타민 B12-엽산 결핍 성 빈혈, 급성 백혈병 백혈병, 재생 불량성 빈혈).
항체 노출 (면역 형태) - 약물,자가 면역 질환 (SLE, 류마티스 성 관절염, 만성 림프 성 백혈병)에 대한 과민 반응, 등 면역 증상 (신생아의 용혈성 질환).
기관의 재분배 및 침착 - 충격 상태, 비장 비대증 및 과민성 질환.
유전 형 (가족 양성 만성 호중구 감소증).
호산구 증의 주요 원인.
기생충 침입 (trichinosis).
만성 피부 병변 - 건선, 천포창, 습진.
종양 (호산 구성 백혈병 변이종).
기타 질환 - 섬유 성 심내막염 Lefflera, 성홍열.
감염 및 염증성 질환의 회복 단계 (유리한 예후 적 증상).
호산구 감소증의 원인 (aneosinophilia).
신체의 부 신피질 홀몬 활동 증가.
호염기구의 주요 원인 :
만성 골수성 백혈병 및 홍역.
monocytosis의 주요 원인.
아 급성 및 만성 세균 감염.
기생충 감염 - leishmaniasis, 말라리아.
Hemoblastosis - monocytic 백혈병, lymphogranulomatosis, 림프종.
다른 조건은 SLE, 유육종증, 류마티스 성 관절염, 감염성 monocytosis; 감염으로부터 회복되는 기간에, 무과립구증을 떠날 때, 췌장 절제술 후.
단핵 세포 수의 감소는 주로 폐결핵에서 림프구 - 단핵 세포 비율을 평가하는데 중요합니다.
림프구 증의 주요 원인.
감염 - 급성 바이러스 (전염성 단핵구증, 홍역, 풍진, 수두), 만성 박테리아 (결핵, 매독, 브루셀라증), 원충 (톡소 플라스마 증).
혈구군 (림프 성 백혈병, 림프종).
기타 질환 - 갑상선 기능 항진증, 애디슨 병, 비타민 B12-빈혈, 빈혈 및 재생 불량성 빈혈.
림프구 감소증은 SLE, 호 지킨 병, 림프절의 광범위한 결핵, 말기 신부전, 급성 방사선 질환, 면역 결핍 상태, 글루코 코르티코이드 복용에서 관찰됩니다.
혈액에서 특정 유형의 백혈구 수의 증가 또는 감소는 상대적이거나 절대적 일 수 있습니다. 백혈구의 특정 유형의 백분율 만 변하면 상대적 호중구 증가증, 상대적 호산구 감소증 등이 발생합니다. 모든 종류의 백혈구의 절대 함량의 증가 또는 감소, 즉 혈액의 단위 부피당 이들 세포의 수를 절대 호중구 증가증, 절대 호산구 감소증 등으로 부릅니다.
수식을 왼쪽으로 이동 시키면 (젊은 형태의 호중구의 수를 늘림) 인체에서 염증이나 괴사 과정의 징후입니다.
백혈구 수식의 오른쪽으로의 이동은 방사선 병과 비타민 B의 특징입니다12-엽산 결핍 성 빈혈.
모든 유형의 과립 백혈구 - 과립구 (호중구, 호산구, 호염기구)의 수의 부재 또는 현저한 감소는 무과립구증 (agranulocytosis)이라는 용어로 지정됩니다. 발생 기전에 따라 골수 독성 (전리 방사선, 세포 증식 억제) 및 면역 (합텐과자가 면역 무과립구증)이 구별됩니다.
백혈구 수
카메라의 계산 방법. 튜브 법으로 생성 된 혈액의 채취 및 희석. 0.4ml의 희석액과 0.02ml의 모세 혈을 튜브 (바람직하게는 Vidalevskaya)에 넣는다. 결과 희석은 실제적으로 1:20으로 간주됩니다. 메틸렌 블루로 염색 된 아세트산의 3-5 % 용액은 희석제로 보통 사용됩니다 (아세트산은 적혈구를 용해시키고 메틸렌 블루는 백혈구의 핵을 얼룩집니다). 보충하기 전에 고료 혈관을 희석하여 채취한다. 챔버는 적혈구 계수와 같은 방식으로 채워집니다.
백혈구는 적혈구보다 훨씬 작습니다 (큰 사각형 당 1-2). 따라서 정확도를 위해 100 개의 큰 사각형 (계산되지 않음)에서 계산됩니다. 계산 : 100 개의 큰 사각형 (1600 작음)이 백혈구로 계산됩니다.
작은 사각형의 체적이 1/4000 mm3이고 혈액이 20 배 희석된다는 것을 기억하면 혈액 1 μl에서 백혈구 수가 계산됩니다 : 4000 20 그리고 1600 = a x 1/2로 나눕니다. 실제적으로 혈액 1 μl에서 백혈구의 실제 함량을 구하려면 계산에서 얻은 수의 반을 나누고 2 제로를 추가하는 것으로 충분합니다. 평균 방법 오차는 ± 7 %입니다.
보다 정확한 (2-3 % 오차) 완전은 전자 장치를 사용하는 백혈구의 수입니다. 입자 카운터에서 백혈구 계산은 적혈구와 같은 원칙에 따라 수행됩니다. 전혈을 희석하고 적혈구를 용해시키는 모든 시약과 혼합합니다. "Technicon"자동 분석기에서 아세트산의 용액은 isotonic sodium chloride 용액 (1 : 500, 1 : 700)에 희석 (20ml 당 6 방울)하여 첨가 된 "Culter"및 "Celloskop"장치 (사포닌 또는 사포 글 로빈) 번식).
혈액 백혈구 계산은 스테인드 말초 혈액 도말 검사에서 수행됩니다.
도말 끝 부분의 가장 얇은 지점, 최소 200 개의 세포 (백혈구 감소증 제외)를 세어 특정 유형의 백혈구 비율을 유도하는 것이 좋습니다. 세는 순서는 똑같은 순서로하는 것이 좋습니다. 세포의 반은 뇌졸중의 맨 아래에서 절반, 뇌졸중의 중간에서 지그재그로 (스트로크를 따라 3-4 개의 시야, 뇌졸중 중간에 직각으로 3-4 개의 필드, 그 다음 가장자리에 평행 한면에 3-4 개의 필드, 다시 한번 직각으로 그리고 한쪽으로 계속해서).
얼룩의 준비. 조심스럽게 세척되고 탈지 된 유리 (그 모서리)는 주사 부위에서 혈액 방울을 만집니다. 얼룩은 그라인딩 유리를 만들어 방울 앞쪽의 슬라이드에 45 ° 각도로 놓습니다. 유리를이 방울로 가져 와서 그 가장자리를 따라 혈액이 퍼지기 전까지 기다렸다가 유리가 앞쪽으로 날아가고 물방울이 완전히 건조되기 전에 피사체로부터 멀리 내리지 않는 빠른 움직임으로 기다립니다.
적절하게 만들어진 도말은 황색을 띠고 (얇은), 유리의 가장자리에 닿지 않고 궤적 (콧수염)으로 끝납니다.
예비 고정 후 마른 얼룩을 염색합니다. 최상의 고정은 절대 메틸렌 알코올 (3 ~ 5 분) 또는 무수 에탄올과 에테르의 동등한 분량의 Nikiforov 혼합물 (30 분)에서 이루어집니다.
주요 혈액 학적 도료는 메틸렌 블루와 그 유도체 - 푸른 색 I (메틸렌 푸른 색)와 푸른 II (푸른 색 I와 메틸렌 블루의 동등한 부분의 혼합물)을 포함하며 산성의 수용성 황색 에오신을 포함한다.
● Romanovsky-Giemsa의 그림. Romanovsky-Giemsa 도료는 Azur II-3g, 수용성 옐로우 에오신 0.8g, 메틸 알콜 250ml, 글리세린 250ml의 성분을가집니다. 작업용 페인트 용액은 증류수 1ml 당 완성 된 페인트 1.5-2 방울의 비율로 준비됩니다. 페인트는 아마도 더 높은 층이있는 도말 위에 부어집니다. 착색 시간 - 30-35 분 이 기간이 지나면 면봉을 물로 씻고 공기 중에서 건조시킵니다. 이 방법에서는 핵을 잘 분화 할 수 있지만 세포질의 중성 세분성은 훨씬 나 빠지므로 말초 혈액도 말을 염색하는데 널리 사용됩니다.
● Pappenheim에 따른 May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa 착색기를 합친 것. 완성 된 염료, 메틸렌 알코올 중 에오신 메틸렌 블루 용액 인 May-Grunwald 고정액을 3 분간 고정 된 스미어 위에 피펫 팅합니다. 3 분 후, 동량의 증류수를 용액을 덮고있는 페인트에 첨가하고 착색을 추가로 1 분간 계속한다. 그 후 페인트가 씻겨지고 도말이 공기 중에서 건조됩니다. 그런 다음 건조 된 도말을 8-15 분 동안 새롭게 준비된 Romanovsky 페인트 수용액으로 다시 칠합니다. 이 방법은 특히 골수 점액의 얼룩에 가장 좋습니다.
말초 혈액의 정상 수치보다 높은 백혈구 수의 증가는 백혈구 증이라고 부르며, 감소는 백혈구 감소증이라고 부릅니다. 백혈구 증 (백혈구 감소증)은 모든 종류의 백혈구 수가 예를 들어 혈액이 두꺼워지는 백혈구 증가와 같이 비례하여 증가 (감소)하는 경우는 거의 없습니다. 대부분의 경우 하나의 세포 유형의 수 (감소)가 증가합니다. 혈액 내의 백혈구의 개별 유형의 수의 증가 또는 감소는 전체 백혈구 수 (정상, 증가 또는 감소)에 따라 상대적이거나 절대적 일 수 있습니다. 백혈구의 수와 형태, 백혈구의 형태 및 비율의 변화는 병원체의 유형과 독성, 병리학 과정의 성질, 과정 및 범위, 유기체의 개별 반응에 달려있다.
백혈구 (leucocytus)
백혈구. 백혈구의 정량적 측정. 카메라 Goryaeva를 사용하여 백혈구를 계산합니다. 백혈구의 정량적 인 내용. 백혈구 증.
백혈구
혈액의 백혈구 수는 형성 속도와 골수에서의 동원뿐만 아니라 조직으로의 이동과 병변으로의 이동, 폐와 비장의 포획에 달려 있습니다. 이러한 과정은 여러 가지 생리 요인의 영향을 받기 때문에 건강한 사람의 혈액에서 백혈구의 수는 변동될 수 있습니다. 하루가 끝날 때까지, 신체 활동, 정서적 스트레스, 단백질 식품 섭취 및 주변 온도의 갑작스런 변화로 상승합니다.
백혈구의 정량 측정
백혈구는 Goryaev 카메라를 사용하고 자동 카운터를 사용하여 계산됩니다.
카메라를 이용하여 백혈구를 세는 고얀 에바
백혈구를 계수하기 위해 혈액을 채취하는 시험 관내 방법 :
- 메틸렌 블루로 채워진 3-5 % 아세트산 용액 0.4ml를 튜브에 붓는다. 모세관 피펫을 사용하여 신선한 방울 (20 배 희석액)에서 혈액 20 μl를 꺼내어 조심스럽게 시험관에 불어 넣고 피펫을 헹굽니다. 잘 섞는다.
- 깨끗하고 건조한 커버 글래스를 챔버 위에 문질러 접촉점에 무지개 링이 형성되도록한다.
- 시험관에서 희석 한 혈액을 잘 섞는다. 둥근 유리 막대의 끝 부분은 혈액 방울을 가져다가 방의 광택 유리 가장자리로 가져옵니다.
- 챔버를 채운 후 백혈구의 침강을 위해 1 분간 휴식을 취합니다.
- 백혈구는 낮은 배율 (대물 렌즈 × 8 또는 × 9, 접안 렌즈 × 10 또는 × 15)과 어두운 시야 (콘덴서가 좁아 지거나 횡격막이 좁아짐)로 간주됩니다.
- 백혈구는 만족스러운 결과를 얻기 위해 100 개의 큰 사각형으로 계산됩니다.
큰 사각형의 부피와 혈액의 희석 정도를 알면 혈액 1 μl와 1 l에서 백혈구 수를 찾습니다. 큰 정사각형의 측면은 1/5 mm이고 면적은 1/25 mm2이며이 정사각형 위의 공간은 1/250 mm3입니다.
백혈구 수 계산식 :
여기서 B는 100 개의 큰 사각형에있는 백혈구의 수입니다.
P - 희석 정도 (20).
백혈구 수
규범 : 4.0-9.0 × 10 9 / L
9.0 × 109 / l 이상의 백혈구 수의 증가를
백혈구 증가증, 4.0 × 10 9 / l 이하의 백혈구 감소증 - 백혈구 감소증. 그러나, 많은 개인을위한 1 리터의 백혈구 3.5 × 10 9 개가 표준 일 수 있습니다. 문헌에 따르면, 그러한 사람들은 면역 저항성이 증가하고 병에 걸릴 가능성이 적으며 혈류보다 50-60 배 이상 많은 조직에서 백혈구를 보유 할 면역 반응이 필요하기 때문인 것으로 보인다. 분명히, 말초 혈액의 백혈구 수가 적은 건강한 개인의 경우 조직 내 보유량이 그에 따라 증가합니다. 이 현상은 유전 적, 가족적 성격 또는 부교감 신경계의 영향력의 증가로 설명됩니다.
백혈구 감소증은 기능적이고 유기적 일 수 있습니다.
기능성 백혈구 감소증은 혈액 형성의 조절 장애와 관련이 있으며 관찰됩니다 :
- 세균성 및 바이러스 성 감염 (장티푸스, 인플루엔자, 천연두, 풍진, 곰팡이 병, 홍역);
- 약물 (sulfonamides, 진통제, 항 경련제, 항 갑상선제, 세포 분열제 및 기타 약물)의 작용하에;
- 근육 활동 중, 외래 단백질의 도입, 신경 및 온도 영향, 기아, 저 삼투 성 상태;
- 거짓 백혈구 감소증은 실온 (4 시간 이상)에서 혈액을 장기간 보관할 때 백혈구 응집과 관련 될 수 있습니다.
골수 무증상에 의한 유기 백혈구 감소증과 지방 조직으로 대체 된 유기 백혈구 감소증은 다음과 같은 경우에 발생합니다.
- 재생 불량성 빈혈;
- 무과립구증;
- 백혈구 성 백혈병;
- 호 지킨 병의 일부 형태;
- 전리 방사선;
- 초조함 (일차 및 이차);
- 콜라겐 질병.
백혈구 증
백혈구 증은 조혈 계의 효과에 대한 반응입니다
외인성 및 내인성 요인. 생리 및 병적 인 백혈구 증가증이 있습니다.
생리 백혈구 증은 다음과 같습니다.
- 소화제 - 식사 후, 특히 단백질 함량이 높습니다. 백혈구의 수는 10.0-12.0 × 10 9 / l를 초과하지 않으며 3-4 시간 후에 정상으로 돌아갑니다.
- 임신 후반기, 월경 중 및 혈액 중 백혈구의 고르지 못한 분포로 인해 정서적 스트레스 (아드레날린), 심한 신체 활동, 냉각, 과도한 햇빛 노출 (햇볕에 탐), 호르몬 (카테콜라민, 글루코 코르티코 스테로이드 등) 주류.
병리학 적 백혈구 증은 절대적으로나 상대적으로 나누어진다.
절대 백혈구 증 - 혈액 내 백혈구 수가 수십만 (100.0-600.0 × 10-9 / l 이상)으로 증가합니다.
- 대부분 백혈병에서 관찰됩니다 : 만성 백혈병 - 경우의 98-100 %, 급성 백혈병의 경우 - 50-60 %. 골수 및 혈액 검사에서 백혈구 비율을 변경하면 백혈병 진단의 기초가됩니다.
상대 백혈구 증가증이 관찰됩니다 :
- 장티푸스, 인플루엔자, 천연두, 풍진, 곰팡이 병, 홍역을 제외하고는 급성 염증 및 전염성 과정. 패혈증에서 가장 큰 백혈구 증가증 (최대 70.0-80.0 × 10 9 / l)이 관찰됩니다.
- 독성 물질 (곤충 독, 내 독소), 전리 방사선 (방사선 조사 직후)의 영향으로;
- 코르티코 스테로이드, 아드레날린, 히스타민, 아세틸 콜린 및 디지탈리스 제제의 작용의 결과로서;
- 조직 괴사 (괴사), 심근 경색, 괴저, 화상, 삼출성 흉막염, 심낭염, 요독증, 간장 혼수의 발병과 함께 말초 동맥의 혈전증;
- 부상, 내부, 부인과 및 기타 출혈에 상당한 혈액 손실.
대부분의 경우 감염증에서 백혈구 수가 증가하면 백혈구 수식이 왼쪽으로 이동합니다
백혈구와 혈소판의 수를 세는 것
백혈구 연구의 정확성에 영향을 미치는 요인
- 상온에서 장기간 보관
혈액 속의 백혈구 함량 규범
연령 백혈구 수
- 1 일 11.6 - 22.0
- 1 주 8.1.- 14.3
- 1 개월 7.6 - 12.4
- 성인 4.0 - 9.0
혈액 중의 백혈구 수를 측정하는 방법.
- 계산 실에서 백혈구 수를 세는 것
- 혈액학 분석기에서 백혈구 계산
계산 실에서 백혈구의 수를 결정합니다.
- 현미경으로 백혈구를 계산하는 것은 100 개의 큰 사각형의 계산 그리드에서 적혈구를 용해시킨 후 제곱의 양과 혈액의 희석에 따라 1 리터의 혈액에 대해 다시 계산 한 후 수행됩니다. 백혈구 수는 혈액 채취 후 2-4 시간 이내에 만들어야합니다.
- 말초 혈에서 유핵 적혈구가 있으면 백혈구와 함께 용혈되지 않고 계수됩니다. 이 경우, 백혈구의 실제 수를 결정하기 위해, 적색 열의 세포 수를 계산 된 총 세포 수에서 뺍니다.
- 예 : 챔버 (또는 분석기)에서 계산 된 백혈구의 총 수 -45x109 / l. 백혈구 수식을 계산할 때, 100 개의 백혈구 당 50 개의 적혈구 (정상 모세포)가 존재한다는 것이 밝혀졌습니다.
우리는 혈액 속의 백혈구의 실제 수를 계산합니다 :
150 세포 - 45 x 109 / l
100 세포 (백혈구) - X
X = 100 * 45 * 10 / 1 / 150 = 30 * 10 / l
따라서 혈액 속의 실제 백혈구 수는 30 x 109 / l입니다.
챔버의 백혈구 계산에서 주요 오류의 원인 :
- 시험관에서 채취 한 혈액 및 아세트산의 부적절 비율.
- 부정확하게 준비된 아세트산 용액 (5 % 이상의 농도에서 일부 백혈구가 용해되어 결과가 과소 평가 될 수 있음).
- 28 ° C 이상의 온도에서 장기간 노출되면 시료에서 백혈구의 용해를 촉진하여 결과를 과소 평가할 수 있습니다.
- Goryaev 챔버의 잘못된 충진. 적혈구 계산과 마찬가지로, 카메라는 세포를 정착시키기 위해 1 분 동안 방치해야합니다.
- Goryaev 카메라는 이전 정의 이후 충분히 잘 닦이지 않았습니다. 챔버에 남아있는 백혈구가 분석 결과를 과대 평가할 수 있습니다.
혈소판 계수법
- 계수 실에서
각 방법 그룹에는 장점과 단점이 있습니다.
- 챔버 내의 혈소판 수는 충분히 정확하고 적혈구 수를 계산할 필요가 없습니다. 다른 한편으로,이 방법은 더 힘들다. 왜냐하면 원래 형태의 혈소판은 작고 대조적이지 않은 요소로 표현되기 때문이다. 이 방법의 단점은 혈액을 채취 한 후 몇 시간 내에 혈소판 수가 계산된다는 것입니다.
- 혈액 도말 검사에서 혈소판 수를 결정하는 것은 챔버 방법 또는 자동 카운터의 정확성이 현저히 떨어진다. 혈액 도말에있는 계산의 오류는 도말의 품질이 낮고 혈소판이 고르게 분포되어 있지 않아서 적혈구 수가 부정확합니다. 이 방법의 중요한 단점은 혈액에서 혈소판과 적혈구를 동시에 세는 것이 필요하다는 것입니다. 혈액 수집의 시간에 관계없이 언제든지 혈소판을 연구 할 수있는 이점이 있습니다.
- 혈액 분석기를 사용하여 혈소판을 결정하는 방법을 사용하면 혈소판 수, 평균 체적 및 체적 분포를 정확하게 결정할 수 있습니다.
백혈구 수
백혈구의 수는 자동 계수기를 사용하거나 Goryaev 챔버에서 계산합니다. 챔버의 백혈구 수를 계산하기 위해 투르 쿠 액을 준비한다. 아세트산 용액은 메틸렌 블루의 수용액으로 색을 칠한다 (0.1 % 메틸렌 블루의 0.1 % 용액을 10 % 아세트산 9ml에가한다). 시험관에 액체 Türk 0.4 ml를 부어 넣는다. 정확히 0.02 ml의 혈액을 조심스럽게 희석액에 첨가하십시오. 혈액 희석은 1:20입니다. 잘 혼합하고 4 분 동안 방치하십시오. 희석 된 혈액으로 조심스럽게 튜브를 흔드는 후에 고어 에바 (Goryaeva) 챔버를 채우십시오. 백혈구 침강을 위해 평평한 표면에 1 분간 방치합니다. 백혈구는 어두워 진 시야를 가진 현미경 (렌즈 8, 접안 렌즈 10 또는 15)의 저배율에서 계산됩니다 (응축기가 낮추거나 좁아진 횡경막을 가짐). 백혈구는 100 개의 비공개 대형 사각형으로 간주되며, 1600 개의 작은 사각형에 해당합니다. 큰 사각형에서 세포를 계산 한 결과는 다음 공식을 사용하여 혈액 1 μl에서 세포 수를 요약하고 계산합니다.
여기서 X는 혈액 1 μl에 포함 된 백혈구 수입니다. A - 100 개의 큰 정사각형에 셀 수, 1600 - 작은 정사각형 수, 20 - 혈액 희석; 4000은 작은 사각형 (1/4000 μl)의 부피를 기준으로 1 μl의 혈액을 생성하는 승수입니다.
백혈구 수 계산 백혈구 번짐을 검사합니다. 혈액 세포의 형태 학적 특성을 정확히 고려하기위한 필수 조건은 적절하게 만들어지고 잘 염색 된 혈액 도말이다. 혈액 도말은 Nikiforov (ethyl alcohol 96º와 diethyl ether 1 : 1)의 혼합물로 숙성시킨 건조하고 깨끗하고 잘 탈지 된 슬라이드 위에 준비합니다. 긴 가장자리를 위해 유리 슬라이드를 가져 가면 펑크에서 나온 혈액 한 방울 (피부는 제외)에 닿거나 마이크로 피펫이나 모세관이있는 혈액 방울을 바르십시오. 유리 슬라이드는 좁은 가장자리에 대해서는 테이블이나 왼손에 잡습니다. 오른손을 사용하여 좁은 가장자리가있는 분쇄 유리를 45 ° 각도로 방울의 왼쪽에있는 혈액과 함께 유리에 바르고 혈액에 닿을 때까지 오른쪽으로 밀어 넣습니다. 그들은 혈액이 갈아서 유리의 가장자리 전체에 퍼지도록 기다렸다가 신속하고 빠르게 움직여 전체 낙하가 없어 질 때까지 오른쪽에서 왼쪽으로 이끈다. 혈액 한 방울은 작아야하고 전체 얼룩이 유리 위에 놓 이도록 가장자리에 1-1.5cm가되지 않도록 작은 비중이어야합니다. 잘 만들어진 도말은 얇고 황색을 띠고 "빗자루"로 끝납니다. 공기 건조 된 혈액 도말을 고정 용 특수 접시 또는 고정 액 (메틸 알콜, 고정 시간 3-5 분, 에틸 알콜 30 분, Nikiforov 혼합물 20-30 분)으로 채워진 일반 유리 잔에 넣습니다. 고정 된 준비물을 공기 중에서 말린 후 Romanovsky-Giemsa 염료로 염색합니다. 완성 된 페인트 용액 Romanovsky-Giemsa (azureosin)는 염색을 위해 필요한 양을 1:10으로 희석했습니다. 고정 된 도말을 묽게 칠한 페인트를 부어서 더 높은 층을 가진 도말 위에 붓습니다. 25-45 분에 방의 공기 온도에 따라 채색이 지속됩니다. 페인트를 마친 후에 페인트를 증류수로 씻어 내고 수직으로 나무 스탠드에 넣어 건조시킵니다. 혈액 도말의 현미경 검사는 100x10 배율로 침지하여 수행됩니다. 백혈구의 계산은 지그재그 라인 ( "Meander line")을 따라 수행됩니다. 백혈구의 개별 형태의 수를 고려하여 100-200 세포를 계산합니다 : 찔러 나고 분열 된 호중구, 호산구, 호염기구, 단핵구, 림프구. 각 세포 유형의 백분율을 계산하십시오.
식세포 및 림프구의 절대 수를 계산한다. 말초 혈액 및 백혈구 수식에서 백혈구 수에 기초하여 상위 척추 동물의 식균 (호중구 및 단구) 및 림프구의 절대 개수를 계산한다.
식세포 기능 검사
식균 지수 및 식균 수의 결정
백혈구의 흡수 및 소화 활성을 평가하기위한 많은 기술이 개발되었다. 이들 모두는 시험 시스템 (미생물의 특정 유형, 자이 모산, 흡수의 대상인 라텍스)을 구성하는 외래 입자를 흡수하는 식균의 능력에 기초합니다. 폭로는 시험 관내 또는 생체 내에서 수행됩니다. 헤파린 또는 시트 레이트 된 신선한 혈액 (또는 식세포 현탁액)을 부유 한 매일의 미생물 현탁액 (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nhilphila) 또는 다른 흡수체와 섞는다. 혼합물을 서서히 혼합하여 서모 스탯 (37-40ºC - 신체의 정상 온도에 따라 온혈, 열 - 사랑 물고기는 26 ° C, 차가운 - 사랑은 낮은 것)에 놓습니다. 15, 30, 45, 60 및 90 분 후, 도말은 슬라이드에서 준비하고, 건조시키고, 메틸 알콜 또는 Nikiforov 혼합물로 고정시키고 Romanovsky-Giemsa에 따라 염색한다. 그들은 침지 된 상태의 도말을보고 식균 작용에 영향을 미치는 식세포의 비율, 식균 지수 - 식세포 백혈구에 포획 된 시험 미생물의 수, 식세포 수 - 활성 호중구 1 개당 식균 개체의 평균 수. 서로 다른 시간 간격으로 지표를 평가하면 식균 작용의 역학을 추정 할 수 있습니다. 일반적으로, 90 분 후, 식균 지수는 미생물의 소화로 인해 45 분 및 60 분 이후보다 낮아야한다. 소화 불량의 경우에는 변하지 않습니다.
니트로 블루 테트라 졸 (NBT-test)의 환원 반응에 의한 식세포의 기능적 활성의 평가
이 검사는 식세포의 살균 기능을 나타내는 지표이며 산소 의존성 살생 능력을 평가할 수 있습니다. 이 살상 메커니즘이 활성화되면 효소 인 NADPH oxidase가 활성화되어 식세포에서 활성 산소 종의 출현을 유도합니다. 세포에서 그러한 물질의 방출은 산소 (호흡기) 폭발이라고하며 NBT 테스트를 사용하여 등록 할 수 있습니다. 이 시험의 배합에서 물질 nitrosinium tetrazolium이 식세포에 첨가되어 세포에 흡수되고 활성 산소 종의 존재시 진한 청색 물질 인 diformazan으로 변합니다. 짙은 파란색 과립이 표면이나 식세포 내부에 고정되면 활성 산소 형태가 많을수록 산소 의존적 인 살상이 더 많이 일어난다.
NBT 테스트는 자발적 및 유도 된 두 가지 버전으로 설정됩니다. 자발적인 NBT 검사를 설정할 때, 식세포는 세포의 예비 활성화없이 NST의 존재 하에서 배양되고, 유도 된 NBT 시험을 수행 할 때, 식균 반응의 활성화 제가 배양 배지에 첨가된다. 두 가지 변형에서 NBT 테스트를 설정하면 유도 된 diformazan 양성 세포의 수 (강도)와 자발적 diformazan 양성 세포의 수 (강도) 사이의 차이 인 세포의 기능적 예비율을 계산할 수 있습니다. 유도 된 NBT 시험의 값은 항원 자극의 존재 하에서 식세포 세포의 활성을 특성화하고 완전한 식균 작용에 대한 준비성의 기준으로 간주된다. 자발적인 NBT 테스트를 통해 활성화되지 않은 식세포의 산소 의존적 살생 메커니즘의 활성화 정도를 추정 할 수 있습니다. 그것은 세포 내 살균 시스템의 활성화 정도를 특징으로합니다.
자발적인 NBT 검사를하기 위해서는 인산 칼륨 완충액 (0.1, pH 7.3) 중 0.2 % NBT 용액 0.05ml와 같은 완충액 0.05ml를 혈액 0.1ml에가한다. 병행하여, 0.05ml의 완충액 대신에 동일한 용량의 식균 활성제 (예를 들어, 50㎍ / ml의 농도에서 발열 성)가 첨가 된 유도 된 NBT 테스트를 설명하기 위해 샘플을 배치한다. 반응 혼합물을 37 ℃의 수조에서 온도 조절한다 (30-60 분). 중간 농도 도말을 준비하고, 공기 중에서 건조시키고 에틸 알콜 또는 Nikiforov 혼합물 (20 분)에 고정시킨 다음, 중성 적색 (0.1 %, 1 분)의 수용액으로 페인트하고,
반응 후, 침지 (100 × 렌즈, 10 × 아이피스)하에 혈액 도말을 현미경으로 관찰합니다. 100 개의 세포 중 diformazan 과립을 포함하는 활성화 된 호중구 (DAN, %)의 비율을 세었다. 세포에 축적 된 디포 포르 마잔의 양에 따라, 그들의 활성을 임의의 단위로 평가하고 호중구 활성화 지수 (IAN, used units)를 계산한다 :
H는 어디 있습니까?네. - diformazan 과립을 포함하지 않는 세포의 수;
H1 - 디포 마산 퇴적물의 면적이 핵 면적의 1/3 미만인 세포의 수;
H2 - 디포 마산 퇴적물이 핵의 전체 크기의 1/3에서 존재하는 세포의 수;
H3 - 디포 마산 퇴적물이 핵의 더 큰 영역을 차지하는 세포의 수.
다음 공식에 따라 수행 된 동원 계수 (KM)의 유도 :